大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取（SD大鼠）

实验材料准备

实验中选择的实验动物为大约2周龄或200克左右的SD大鼠。准备过程中需使用灭菌器械，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪以及磁珠等。此外，准备5mL注射器、022μm滤器、泡沫板、图钉用于固定大鼠。消毒剂使用75%乙醇，而预冷的无菌PBS水、15mL和50mL的无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶等也是必不可少的。培养基方面，需选用SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。

实验操作步骤

在超净工作台内，首先对所需物品进行紫外消毒30分钟。接着，配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶并进行过滤除菌。在对大鼠实施颈部脱骨以致死后，立即将其浸泡在75%酒精中2-3分钟，然后将其固定在泡沫板上。小心地剪开大鼠腹股沟区的皮肤，暴露出脂肪组织。在剪取脂肪组织的过程中，应尽量避免剪到血管。同时，用PBS对脂肪组织进行清洗，去除多余的血管和淋巴结。

将脂肪组织剪成适宜大小（如2mm×2mm），加入胶原酶进行消化，保持在37℃条件下，每隔5分钟轻轻震荡或持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移至离心管，进行离心处理，弃去上层脂滴泡沫及上清液，并用培养基重悬沉淀。再次进行细胞悬液的过滤，待离心后重复弃去上清，用培养基重悬并接种到培养瓶中。最后，将培养瓶置于37℃、含有5%CO2的培养箱中进行培养。

注意事项

在整个实验过程中，必须严格保持无菌操作，以防细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗过程需要特别细致，以避免对细胞造成损伤或引入杂质。在消化过程中，需严密控制消化时间和温度，以免过度消化导致细胞受损。而在离心及过滤过程中，则必须轻柔操作，避免细胞的损失或破裂。

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