关键词：肝微粒体，药物-药物相互作用（Drug-drug interaction, DDI），细胞色素P450酶（Cytochrome P450, CYP450），时间依赖性抑制（Time-dependent inhibition, TDI）。药物-药物相互作用（DDI）是临床中导致严重不良反应甚至死亡的重要原因之一，因此，进行DDI发生可能性及其影响程度的科学评估至关重要。细胞色素P450酶（CYP450）作为体内关键的药物代谢酶，DDI评估主要包括代谢表型研究、酶诱导与抑制作用评估。CYP450酶的抑制作用可分为可逆性抑制和时间依赖性抑制（TDI），后者的安全性隐患更为显著，因此逐年受到监管机构与制药企业的关注。

一、CYP酶介导的时间依赖性抑制概述 CYP酶介导的酶抑制是指某些化合物降低特定CYP450代谢酶的活性。在联合用药时，某些药物可能会导致代谢减慢、清除率下降和药物暴露量增加，从而带来安全风险。其中，时间依赖性抑制（TDI），又称不可逆性抑制，通常是指候选药物通过CYP酶的代谢产物，以共价形式与酶结合，导致其失活，且去除抑制剂后，抑制效应不会立即消失，而是呈现出时间依赖特征。相较于可逆性抑制，TDI对药物安全性构成更大威胁。

例如，抗高血压药物米贝拉地尔（mibefradil）因被发现具有TDI作用而被迫退出市场。米贝拉地尔会对CYP3A4产生不可逆抑制，导致联合用药其他药物的血药浓度显著升高，甚至造成患者死亡。因此，TDI不仅威胁患者健康，也给制药企业带来重大挑战。

二、TDI的体外试验评估 TDI的评估通常使用人肝微粒体作为体外孵育系统。目前常用的评估方法包括Single-point法、IC50位移法（IC50 shift）和Kinact/Ki法。 - Single-point法：设计一个或两个试验浓度（通常为1μM/10μM）、一个探针底物浓度，以及±NADPH预孵育一个时间点。评价参数为相对剩余活性，相对剩余活性＜80%提示存在潜在的TDI风险。 - IC50位移法：设置系列抑制剂浓度和一个探针底物浓度，预孵育30分钟以测定IC50值，IC50位移≥15提示药物存在TDI。 - Kinact/Ki法：使用系列试验浓度与探针底物浓度，多个时间点进行±NADPH预孵育，以便进行更精确的DDI预测。

三、IPHASE时间依赖性抑制试验数据分析 在此基础上，尊龙凯时利用IC50位移法验证不同抑制剂对人肝微粒体CYP3A4的TDI作用。设置预孵育时间0min和30min，抑制剂浓度涵盖从0μM到100μM。通过液相-串联质谱（LC-MS/MS）检测6β-羟基睾酮的生成量，以计算IC50值。

结果显示： 1. 对于某抑制剂，30分钟预孵育后NADPH（+）组的IC50=691μM，NADPH（-）组的IC50=876μM，IC50位移倍数=127，不存在TDI作用。 2. NADPH依赖的TDI，NADPH（+）组IC50曲线左移；IC50位移倍数=1973，提示存在TDI。 3. 对于无NADPH依赖的TDI，尽管NADPH（+）组没有明显左移，但经过30分钟预孵育仍表现出时间依赖性。 4. NADPH依赖的酶代谢显示，NADPH（-）组与0min预孵育组一致，NADPH（+）组则发生右移，提示发生可逆性抑制和代谢作用。 5. 最后，非NADPH依赖的酶代谢也使得30min预孵育组相较0min预孵育组IC50右移。

四、IPHASE相关产品介绍 药物相互作用是新药研发的重要评估标准，而CYP酶介导的TDI评估则是此研究中的重要组成部分。尊龙凯时凭借先进的设备和专业团队，开发多种高纯度、高活性的肝微粒体产品，支持客户进行CYP酶介导的TDI及其他相关研究。我们的产品包括来自多种动物种属的人、猴、犬、大鼠、小鼠等的肝微粒体，规格为0.5mL，浓度为20mg/mL。

关于尊龙凯时，我们致力于为创新药物研发及生命科学研究提供优质生物试剂，品牌宗旨为“Innovative Reagents For Innovative Research”。如需咨询更多信息，请致电400-127-6686。