关键词：肝微粒体，药物-药物相互作用（Drug-drug interaction, DDI），细胞色素P450酶（Cytochrome P450, CYP450），时间依赖性抑制（Time-dependent inhibition, TDI）

药物-药物相互作用（DDI）在临床上是引发严重不良反应甚至死亡的重要因素之一，因此，科学评估DDI的发生可能性、严重性及其影响程度显得尤为重要。细胞色素P450酶（CYP450）是重要的药物代谢酶，DDI的评估主要集中于代谢表型研究、酶诱导作用的评估及酶抑制作用的评估。在这些评估中，药物对CYP450酶的抑制作用可以分为可逆性抑制和时间依赖性抑制（TDI）。与可逆性抑制相比，TDI可能导致更严重的用药安全问题，因此逐渐受到监管机构和药物研发者的关注。

CYP酶介导的时间依赖性抑制

CYP酶介导的抑制作用是指某些化合物能抑制特定CYP450酶的活性，导致联合用药时代谢减慢、清除率降低及药物暴露量增加，从而引发安全隐患。根据抑制机制的不同，药物对CYP450酶的抑制可分为可逆性抑制和时间依赖性抑制。TDI又被称为不可逆性抑制，通常是指候选药物的代谢产物通过共价键与酶结合，使酶发生不可逆失活，进而抑制效果在去除抑制剂后不会立即消失，呈现出时间依赖性特征。与可逆性抑制相比，TDI的发生可能导致药物暴露量非线性增长和血药浓度大幅升高，从而对患者健康构成严重威胁。

TDI体外实验评估

时间依赖性抑制的体外实验评估一般采用人肝微粒体作为研究系统。常规的TDI评估方法包括Single-point法、IC50位移法和Kinact/Ki法。

Single-point法的试验设计使用一个或两个试验浓度（通常为1μM或10μM）和一个探针底物浓度，+/-NADPH在一个时间点进行预孵育。这是一种粗略的评估方法，适合早期和高通量筛选。评价的标准为相对剩余活性，如相对剩余活性＜80%则提示潜在的TDI风险。

IC50位移法则包含一系列试验浓度和一个探针底物浓度，+/-NADPH预孵育30分钟。此方法提供相对精准的评估，适用于粗略的DDI预测，其评价标准为IC50位移≥15，提示在研药物存在TDI。

Kinact/Ki法涉及一系列试验浓度和探针底物浓度，+/-NADPH在多个时间点进行预孵育。这是一种精准测定的手段，可用于DDI的更准确预测，结合临床PK数据计算R2值以评估临床意义。

IPHASE TDI试验数据分析

IPHASE作为体外研究生物试剂的领导者，采用IC50位移法验证不同抑制剂对人肝微粒体CYP3A4酶的TDI作用。试验中，通过液相-串联质谱（LC-MS/MS）检测已知底物的代谢产物生成量，进而计算IC50值。分析过程中，观察到不同抑制剂表现出不同的TDI作用，这些结果有助于进一步了解药物相互作用的机制。

结论

药物相互作用是新药研发中的重要评价标准，而CYP酶介导的时间依赖性抑制作用则是其评估的重要组成部分。作为领先的生物试剂提供商，强大的技术团队和丰富的研发经验使尊龙凯时能够为广大客户提供高活性、高纯度的肝微粒体产品，助力CYP酶介导的TDI及其他相关研究。

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