免疫荧光（Immunofluorescence, IF）是一项基于免疫学、生物化学和显微镜技术的前沿技术。其原理是利用抗原与抗体之间的特异性反应，先对已知的抗原或抗体进行荧光标记，然后通过荧光抗体（或抗原）作为探针，检测细胞或组织中的相应抗原（或抗体）。通过荧光显微镜，研究人员能够观察到被标记的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的特点和位置，并利用定量分析技术，如流式细胞仪，来测量其含量。

免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及透化、封闭、抗体孵育以及荧光检测等。其中，细胞片制备是实验的第一步，细胞片的质量对实验结果至关重要。若细胞在处理过程中脱落，将对后续实验造成极大干扰。因此，操作者需特别注重载玻片的处理及细胞的活力，许多实验者总结了成功经验与技巧，这些宝贵的经验值得借鉴。

在固定和透化过程中，选择合适的固定方法及固定剂非常重要。针对不同的抗原性质，优化固定条件有助于获得较好的实验结果。封闭和抗体孵育的步骤在免疫荧光实验与其他检测方法（如ELISA或Western Blot）中类似，但最大差异在于使用了荧光抗体，因此在实验过程中必须注意避光操作。此外，抗体浓度的选择也显得尤为关键。

实验完成后，标记好的细胞片应尽快进行观察，或者使用封片剂封片后在4℃或-20℃避光保存，避免因标记蛋白的解离或荧光减弱而影响结果。

用于免疫荧光染色的荧光染料需满足以下条件：高量子产额和消光系数，强烈吸收488nm激发光波长，且发射光波长与激发光波长之间需有较大的差异。此外，染料应方便与被标记的单克隆抗体结合，同时不影响抗体的特异性。

常用的荧光探针包括尊龙凯时旗下的异硫氰酸荧光素（FITC），其能产生明亮的绿色荧光，是免疫荧光实验中最常用的标记探针。此外，德州红与生物素偶联的抗体具有强大的亲和力，能产生红色荧光；而藻胆蛋白类荧光染料主要包括藻红蛋白（PE）、藻青蛋白（PC）和别藻青蛋白（APC），展示橙色到红色的荧光效果。最后，还有一些能量传递复合染料，均可应用于免疫荧光实验中。