在生物医学研究中,一抗和二抗的种属来源通常是一致的。在选择二抗时,必须考虑一抗的来源,以确保二抗能够有效发挥作用。例如,若一抗是源于小鼠的单克隆抗体,则应选择抗小鼠的二抗(如山羊或兔源抗小鼠)。
一抗的定义与作用
一抗(primary antibody)是一种免疫球蛋白,特异性结合特定蛋白,以实现其纯化、检测和定量。根据来源的不同,一抗可分为多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),前者源于多个B细胞克隆,而后者则来自于单一B淋巴细胞的分泌。
二抗的定义与功能
二抗(secondary antibody)与靶抗原结合后,通常用于标记和检测一抗。二抗可能是完整的抗体或抗体片段,例如IgG分子、Fab片段或F(ab')2片段。
在选择二抗时,需要重点考虑以下几个因素:
- 一抗的种属来源:二抗应选择与一抗相同物种来源的抗体。例如,当一抗为小鼠源单克隆抗体时,建议使用抗小鼠的二抗(如山羊或兔源抗小鼠)。
- 一抗的类别和亚类:二抗需与一抗的类别或亚类匹配。多克隆抗体通常为IgG类免疫球蛋白,因此应选用相应的抗IgG二抗;而单克隆抗体则因亚型的不同而需要选择与之相符合的二抗。
- 实验类型:不同性质的实验可能需要不同的二抗。例如在双标实验中,如果两个一抗分别来源于不同的种属,二抗应选用来自第三种种属的抗体,以减少交叉反应的风险。
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