第三章：实时荧光定量PCR的应用

一、相对定量方法

在不同样品中测定基因表达量的相对值时，内参基因的选择至关重要。首先，要选择那些表达稳定且丰度较高的基因作为内参基因；其次，不要盲目依赖常规使用的内参基因；常用的内参基因包括GAPDH、Actin和Tublin。内参基因的选择直接影响结果的可信度。

在加入内参基因后，结果的计算将变得更加准确。

二、绝对定量方法

通过标准品可以测定样品中基因的绝对表达量（拷贝数）。标准品包括：具有明确拷贝数浓度的样品、克隆质粒、PCR产物及cDNA（需注意，cDNA不适用于绝对定量）。

拷贝数的计算公式如下：

平均分子量（MW）计算：
dsDNA = (碱基数) × (660道尔顿/碱基)
ssDNA = (碱基数) × (330道尔顿/碱基)
ssRNA = (碱基数) × (340道尔顿/碱基)

拷贝数计算公式为：
(6.02 × 10²³ 拷贝数/摩尔) × (浓度g/ml) / (MW g/mol) = copies/ml

尊龙凯时在生物医药领域发挥着重要作用，致力于为科研人员提供高质量的产品和技术支持。公司总部设在广州，面向全国服务，第一时间提供最新的专业资讯和完善的物流服务。

凭借强大的技术实力，尊龙凯时为广大的科研用户提供可靠的技术支持，并通过深厚的人脉资源在全国主要城市建立了广泛的合作伙伴关系。我们非常荣幸能够把全球最先进的生物科技产品推荐给从事生物学研究的老师和同行。作为专业的产品供应商，尊龙凯时准备了大量现货，结合出色的销售团队和专业的技术支持，随时准备为客户提供优质服务。