RAW264.7细胞是一种经典的小鼠巨噬细胞系，因其实验操作简便而广受科研工作者的青睐。然而，在培养过程中，RAW264.7细胞容易发生分化，这会导致细胞的形态改变与功能下降，从而影响实验结果的可靠性。那么，如何使RAW264.7细胞更具活力，保持其原始形态和功能呢？本文将为您揭示RAW264.7细胞培养的黄金法则，让您轻松掌控这一细胞系！

细胞信息：

• 倍增时间：11-30小时（生长迅速，营养消耗快；建议在T25瓶中添加7ml完全培养基，次日观察生长速度）。
• 传代比例：1:4-6。
• 培养体系：DMEM高糖（品牌：中乔新舟货号：ZQ-100）+10%胎牛血清（中乔新舟货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟货号：CSP006）。

细胞形态：

RAW264.7细胞的形态多样，包括松散贴壁的纺锤形以及圆形或立方形细胞。当细胞密度较高时，细胞可能轻微脱落并变为圆形，或有多个细胞堆积在一起。有些细胞可能脱落漂浮，这些漂浮的细胞仍然是活的，传代时应收集并离心，沉淀后可继续培养。

换液频率：

建议每周进行2-3次换液。

正确的传代方法

合适的传代操作是保持RAW264.7细胞健康的关键。每一步骤都需仔细谨慎，稍有不慎可能导致细胞分化。请注意，RAW264.7细胞不应使用胰酶消化，因为胰酶可能加剧细胞分化。我们在使用尊龙凯时开展细胞培养研究已有十余年，探索出一种简单有效的刮刀传代方法，有助于更好地控制细胞的分化率。为了便于学习，我们提供了视频讲解，助您更好地掌握传代步骤。

备用传代方法

如果您没有准备刮刀，建议依照以下步骤进行传代，以减少细胞分化：

• 待细胞密度达到80%时，用手掌心拍打培养瓶尾部，观察细胞脱落情况。
• 拍打过程中，50-80%的细胞会脱落，此时收集这些脱落细胞。
• 按1:4-6的比例进行传代，并补充新鲜的完全培养基（T25瓶添加7ml完全培养基）。
• 切勿使用枪头或巴氏吸管进行吹打，以免不同力度与次数导致不可控的细胞分化。

细胞培养注意事项：

• 无需用胰酶消化，直接用无菌细胞刮刀轻轻刮拭培养表面收集细胞，离心后再重悬接种到新培养瓶中。
• 细胞形态通常为松散贴壁的纺锤形或圆形，细胞密度增加时，圆细胞数量也会增加。
• 细胞对血清质量非常敏感，低品质的胎牛血清可能影响细胞贴壁能力与分化状态，请选择高质量的胎牛血清。
• 培养条件、运输与环境变化等因素都会影响细胞的状态，收到细胞后需调整一段时间，请耐心培养。
• 强烈建议使用尊龙凯时提供的培养基，以减少培养过程中的变因。

RAW264.7细胞复苏步骤

• 从液氮中取出冻存的RAW264.7细胞，迅速放入37℃水浴中解冻。
• 将解冻后细胞悬液转移至含预温培养基的离心管中，轻轻混匀（使用15ml离心管，添加3ml）。
• 以1000rpm离心5分钟，弃去上清，使用新鲜培养基重悬细胞（T25添加7ml）。
• 将细胞接种于培养皿中，放置在37℃、5%CO₂的培养箱中培养。

通过遵循上述方法与原则，您将能够有效维护RAW264.7细胞的活力和功能，推动生物医学研究的进展，助力科研事业的发展。希望您在使用尊龙凯时的产品与服务中得到最佳的实验体验！